實驗動物豬1000例麻醉的應(yīng)用研究

周立才 張秀蘭 石晶 王利娜 金大慶 李衛(wèi)民

(首都醫(yī)科大學平谷教學醫(yī)院，北京 平谷 101200)

【摘要】：目的：通過本中心1000例的實驗動物豬的麻醉，總結(jié)出一種豬實用的麻醉方法。方法：對本中心4年來共1000例豬選用咪達唑侖0.1-0.2mg/kg及速眠新0.25—0.3ml/kg復(fù)合肌注誘導鎮(zhèn)靜，琥珀酰膽堿、地西泮注射液、利多卡因加入到平衡液中配成麻醉混合液緩慢靜脈滴注維持的方法實現(xiàn)對豬耐受各種手術(shù)的麻醉。結(jié)果：6例豬在麻醉過程中由于操作不當，于氣管插管前后不幸死亡，1例死于氧氣供給缺乏，9例死于術(shù)中大出血，其余豬均順利維持到手術(shù)結(jié)束。結(jié)論：速眠新和地西泮復(fù)合用藥，用于豬的麻醉是非常經(jīng)濟、實用的，有很好的應(yīng)用價值。

【關(guān)鍵詞】：豬;實驗動物;麻醉

【Abstract】: Objective: through the experimental animal center of anesthesia in 1000 cases of swine, summarized the anaesthesia method of pig practical. Methods: the center for 4 years a total of 1000 cases of swine using midazolam 0.1—0.2mg/kg and Sumianxin 0.25—0.3ml/kg intramuscular injection induced sedation, succinylcholine, diazepam injection, lidocaine was added to the equilibrium liquid with method of anesthesia mixture slow intravenous infusion to maintain the pig tolerance of various operation anesthesia. Results: 6 cases of swine during anesthesia due to improper operation, in the before and after tracheal intubation, died, 1 cases died from lack of oxygen supply, bleeding in 9 cases died during operation, the remaining pigs were successfully maintained to the end of operation. Conclusion: Sumianxin and diazepam combined with medication, for the pig anesthesia is very economical, practical, has the good application value.

【Keywords】: Pig; animal experiment; anesthesia

隨著醫(yī)學技術(shù)的迅猛發(fā)展，各種新的儀器設(shè)備及新的手術(shù)方式在向臨床不斷的推廣，在這些設(shè)備及技術(shù)運用到臨床推廣之前通常要在實驗動物上模擬真實的手術(shù)，用以驗證可行性及可操作性。我中心自2009年4月至今的四年中，開展了外科腹腔鏡培訓班40多期，消化內(nèi)鏡及心臟介入的培訓班30多期，協(xié)助外院完成醫(yī)學課題研究40多項。各種實驗動物麻醉近2000例，其中實驗用豬的麻醉已經(jīng)超過了1000例，從中總結(jié)了對動物豬麻醉的一些麻醉原則、方法、注意事項，現(xiàn)介紹如下。

1 材料與方法

1.1實驗動物：本中心2009年4月——2013年4月的四年間麻醉的實驗用豬共計1000頭，3—24個月，均為雌性，體重40±20kg，臨床檢查健康，由北京市房山區(qū)琉璃河實驗用豬場購入。在同一環(huán)境下飼養(yǎng)3—7天再進行實驗。

1.2 實驗器械和藥品：實驗器械有麻醉機、監(jiān)護儀、麻醉床、喉鏡、聽診器及其它常用的物品。實驗藥品包括阿托品、地塞米松、咪達唑侖、速眠新、琥珀酰膽堿、地西泮注射液、利多卡因等。

1.3 實驗方法：實驗動物和實驗人員麻醉前均做好充分的準備，麻醉過程中注意實驗動物的生理反應(yīng)和生命體征變化。

1.3.1 麻醉前的準備

1.3.1.1 實驗動物的術(shù)前準備：根據(jù)不同的實驗操作選擇合適的實驗動物。一般做腹腔鏡手術(shù)的豬需要15-20KG左右，這樣的豬體內(nèi)各個器官已經(jīng)基本發(fā)育完全，體型偏小有利于腹腔鏡器械的操作。而行心臟介入的豬最好為50KG以上，以便術(shù)者更好的尋找目標血管以及在該血管中進行手術(shù)操作。術(shù)前禁食水是術(shù)前至關(guān)重要的環(huán)節(jié)。通常情況下要做到實驗前對豬禁食6-8小時，禁水2小時，以保證其胃部的空虛，防止充滿食物的胃壓迫膈肌而影響豬的呼吸1。同時防止豬的嘔吐及誤吸。不僅有利于氣管插管的操作，同時也提高了實驗動物操作的安全性。如果需要進行胃腸鏡手術(shù)，則至少需要禁食72小時，禁水12小時，以充分達到胃排空的目的，有利于術(shù)中暴露清晰的視野。同時，術(shù)前盡量將實驗動物單籠飼養(yǎng)(見圖1)，每天定期進行籠舍的清理。不僅可以避免豬產(chǎn)生的大量污染物影響手術(shù)室的環(huán)境衛(wèi)生，同時在一定程度上提高了術(shù)中無菌環(huán)境的程度。

1.3.1.2 麻醉人員的術(shù)前準備：作為麻醉工作者，術(shù)前必須掌握實驗動物的一般情況，根據(jù)豬的身體狀況調(diào)節(jié)麻醉藥劑量，對體弱豬適量減少麻醉用藥。麻醉前應(yīng)穿戴合適的手術(shù)衣、帽子、口罩、無菌手套，做好自身的防護。根據(jù)所要實施的手術(shù)制定合理的麻醉方案，準備所需要的麻醉儀器、設(shè)備、藥品等。

1.3.1.3麻醉物品的術(shù)前準備： 實驗儀器準備：麻醉機、監(jiān)護儀、吸引器各一臺，術(shù)前檢查連接正確，性能良好無漏氣。檢查氧氣氣源是否充足，鈉石灰是否變色，變色時及時更換，以免造成CO2蓄積中毒。插管準備：喉鏡、管芯、氣管導管、吸痰管、注射器、牙墊、舌鉗、聽診器、簡易呼吸器等。豬的氣管導管較細，一般體重在25KG一下的豬選擇直徑小于6mm的氣管導管，50KG的豬選用內(nèi)奸為9mm氣管導管，而體型較大的豬其導管直徑在14-16mm[1]。由于豬的口腔與咽喉間的夾角較小，趨于平行(見圖3)，與人的口咽近乎垂直的夾角有明顯的差別(見圖2)，故本中心特制了直鏡，更方便挑起豬的會厭。成年豬的口腔至會厭根部的距離較人的明顯長，本中心對喉鏡的葉片長度也做了適當?shù)募娱L(見圖4、圖5)，更符合豬的咽喉部的生理解剖。

1.3.1.4麻醉誘導藥、麻醉維持藥及輸液用品的準備：術(shù)前準備相應(yīng)的麻醉藥品及常用的搶救藥物，如阿托品、多巴胺等，放到準備好的盤子內(nèi)。待豬保定麻醉后開放外周靜脈通路，通常選擇雙下肢作為穿刺點。

1.3.2麻醉誘導階段

1.3.2.1誘導前給藥：麻醉誘導前常規(guī)給予肌肉注射阿托品0.5mg和地塞米松10mg，用來減少唾液腺及氣管腺體的分泌，防止過敏反應(yīng)。麻醉誘導藥物選用咪達唑侖0.1-0.2mg/kg及速眠新0.25—0.3ml/kg復(fù)合用藥，觀察豬的反應(yīng)，一般給藥5-10分鐘后，豬變得安靜、閉眼、嗜睡，對外界刺激反應(yīng)差，其后自行臥地，此時稱之為保定麻醉。將誘導麻醉后的豬放置到特制的操作床上(見圖6)。取仰臥位，固定四肢于操作床的四角，防止插管過程中豬過分的躁動。

1.3.2.2 誘導后氣管插管：盡量伸展其頭部和頸部，助手將舌拉出，用兩塊大紗布分別上下固定上頜骨及鼻腔，防止劇烈的吞咽動作影響插管的操作(見圖7)。麻醉師左手持喉鏡柄，將喉鏡片從口腔一角進入，移至口腔中央，再進喉鏡前端達到舌根，挑起會厭顯露聲門，右手持氣管導管對準聲門裂，等待豬呼吸過程中聲門打開的一瞬間，直接將氣管導管通過聲帶和喉中部的背側(cè)之間向氣管內(nèi)插入(見圖8)，判斷插管進入氣管后給予套囊注氣10—15ml。連好麻醉機，調(diào)整好參數(shù)(呼吸頻率15次左右，潮氣量12ml/kg)，將牙墊與氣管導管用醫(yī)用膠布固定，防止氣管導管滑落脫出。插管時遇阻力可能是聲門下狹窄或?qū)Ч苓^粗所致，這時要旋轉(zhuǎn)導管或換細導管。豬躁動不安不易插管是由于保定麻醉淺，可靜推琥珀酰膽堿，加大肌肉松弛，減少實驗動物躁動，待肌顫停止，快速插管。在氣管插管的過程中一定要注意避免過分粗暴，以免損傷喉粘膜而導致喉頭水腫或在拔除導管后發(fā)生呼吸梗塞。

判斷氣管插管成功的方法：

A、氣管導管有濕熱氣流呼出

B、聽兩肺呼吸音左右上下均勻一致

C、兩側(cè)胸廓同時均勻起伏，無上腹部隆起

1.3.3 麻醉維持階段

麻醉維持用藥是用琥珀酰膽堿6支，地西泮注射液6支，利多卡因7支加入到500ml平衡液中配成麻醉混合液緩慢靜脈滴注，先快速滴注5-10ml，待實驗動物麻醉完全后，減慢滴速到40-60滴/分鐘。術(shù)中給予心電監(jiān)護，隨時監(jiān)測動物的血壓、脈搏、血氧濃度的情況，監(jiān)測動物的生命體征。為了預(yù)防動物麻醉過深，麻醉機旁應(yīng)常規(guī)準備搶救藥物，如尼可剎米、東莨菪堿、腎上腺素等。對于手術(shù)操作時間短，麻醉深度要求不高的動物實驗，也可以選用丙泊酚50ml溶于5%的葡萄糖溶液250ml中配成的麻醉混合液緩慢滴注，其麻醉誘導快，維持時間短，恢復(fù)較快。但丙泊酚可使外周血管阻力下降、心肌抑制、心輸出量減少，對呼吸也有明顯的抑制作用，若需靜脈注射需在1min內(nèi)緩慢靜推，以避免出現(xiàn)血壓下降過快和呼吸暫?，F(xiàn)象[2]，同時觀察心電監(jiān)護，注意生命體征變化

1.3.4 麻醉恢復(fù)階段

如果術(shù)后的實驗動物需要留觀，于手術(shù)結(jié)束前30—40分鐘開始停藥，繼續(xù)輸液、通氣，手術(shù)結(jié)束后可給予麻醉拮抗劑陸醒寧，劑量為速眠新的1/2。待自主呼吸恢復(fù)，通氣量足夠;咳嗽、吞咽反射恢復(fù);四肢活動頻繁;血壓、脈搏平穩(wěn)以后，吸凈口、鼻、咽、氣管內(nèi)分泌物后，拔除氣管插管，送回動物病房。將其放置在溫暖的環(huán)境中，避免發(fā)展為體溫過低。密切觀察生命體征，緊急搶救可能發(fā)生的呼吸阻塞。緩解動物術(shù)后疼痛，必要時采用麻醉性止痛藥;在這類藥物中，最常用的是嗎啡(0.1-20mg/kg)和哌替啶(2mg/kg)1。

2 結(jié)果

2.1 麻醉誘導階段：動物共死亡6例，其中2例死于將麻醉維持液誤當平衡液靜脈滴入，導致動物肌松后未能及時給予吸氧而窒息而死。另外4例死于將氣管插管插入食道，機械通氣后胃脹明顯卻不能及時排除。

2.2 麻醉維持階段:動物共死亡10例，其中1例死于機械通氣后氧氣消耗完畢但未及時發(fā)現(xiàn)并處理，導致低氧血癥而死。另外9例死于術(shù)者操作不當，損傷大血管造成大出血而未能充分補液。

2.3 麻醉恢復(fù)階段：術(shù)后動物死亡比例較高，大部分因術(shù)中造成內(nèi)臟及組織損傷嚴重，術(shù)后不能耐受而直接處死。部分死于氣管插管拔除過早，導致動物缺氧而死。部分因手術(shù)傷口感染嚴重，術(shù)后抗炎不充分而死。

3 討論

動物麻醉是門新興的、發(fā)展迅速的學科。由于動物不能自主反映自身的不適，術(shù)后缺乏必要的化驗檢查及監(jiān)護手段，因此麻醉的成功與否是決定動物術(shù)后轉(zhuǎn)歸的關(guān)鍵因素。臨床實踐中動物的麻醉有許多相似之處，又各有不同。在麻醉藥物和麻醉方法的選擇上有很多差別需要注意。

根據(jù)不同動物實驗時間選擇麻醉藥物 如動物實驗需要動物保持較長時間麻醉狀態(tài)、麻醉程度較深，可選擇具有較強鎮(zhèn)靜催眠作用的戊巴比妥鈉，咪達唑侖、地西泮注射液[3];如所需時間較短、麻醉程度較淺，可使用中樞性抑制但作用短效的乙醚，以及對中樞抑制弱、蘇醒快的鹽酸氯胺酮及速眠新[4]。戊巴比妥鈉有降低心率和抑制心肌收縮力的作用，心臟介入手術(shù)盡量避免使用[4]。氯胺酮具有較強的藥物濫用潛力，屬于管制藥品，不適于在動物麻醉中廣泛使用。

根據(jù)不同麻醉途徑選擇麻醉藥物 速眠新、咪達唑侖通過肌肉注射，戊巴比妥鈉、鹽酸氯胺酮、地西泮注射液需通過靜脈注射，而乙醚作為吸入性麻醉劑，通常經(jīng)過吸入的方式用藥，但考慮乙醚有在空氣中擴散污染的風險，應(yīng)盡量減少使用，降低麻醉藥品對自身的危害。

復(fù)合麻醉藥物的選擇 復(fù)合麻醉可以避免單純使用一種麻醉藥物時麻醉時間過長、麻醉強度過深造成的藥物大量蓄積，減少由于藥物劑量產(chǎn)生的副作用對機體可能帶來的不利因素，有效降低了麻醉風險[6]。

本中心四年來致力于動物實驗的研究，積累了許多動物麻醉的實驗數(shù)據(jù)，總結(jié)了大量的動物麻醉經(jīng)驗。尤其對豬的麻醉熟練程度、用藥規(guī)律、操作技巧有著很深的認識。在麻醉誘導階段，常規(guī)應(yīng)用速眠新作為麻醉誘導劑，與其他藥物如戊巴比妥鈉等相比，其具有麻醉誘導快、用量節(jié)省、用法簡單、安全系數(shù)高、麻醉效果強、經(jīng)濟效益好的優(yōu)勢[7]，建議在動物實驗中推廣使用;而在麻醉維持階段，丙泊酚的維持麻醉應(yīng)注意藥物的副作用，本院自行研制的由琥珀酰膽堿、地西泮注射液、利多卡因配成的麻醉混合液具有麻醉誘導快、安全系數(shù)高、節(jié)約麻醉成本的優(yōu)勢，建議在動物實驗中借鑒使用;麻醉恢復(fù)階段，應(yīng)注意觀察動物術(shù)后的各項生理反應(yīng)，判斷恢復(fù)情況。避免過早的拔除氣管插管造成的動物缺氧造成的窒息及死亡、增加麻醉風險、影響實驗效果。

在醫(yī)學動物實驗中，實驗動物的麻醉是能否保證實驗順利進行、得到預(yù)期結(jié)果的重要環(huán)節(jié)之一。麻醉者是保障動物實驗順利進行的保障者，要在認真掌握麻醉理論和技術(shù)的基礎(chǔ)上，不斷總結(jié)經(jīng)驗和教訓，并借鑒人類臨床麻醉技術(shù)，結(jié)合其新進展，探索出對動物實驗更安全、更有效、更科學的麻醉方法，高質(zhì)量保障好動物實驗的順利進行。

參 考 文 獻

1) 王洪斌.現(xiàn)代獸醫(yī)麻醉學 .中國農(nóng)業(yè)出版社編印【M】2010:336-344.

2) 廖新權(quán),劉領(lǐng)漢,謝光平等. 丙泊酚在小動物麻醉上的應(yīng)用簡介. 廣東畜牧獸醫(yī)科技【J】, 2011,36(2):45-46.

3) 王占元,楊培梁,劉秋菊等.常用實驗動物的麻醉. 中國比較醫(yī)學雜志【J】,2004,14(2):245-246.

4) 李堯清,楊小玲,秦建瓊等. 氯胺酮在實驗動物麻醉中的應(yīng)用分析. 上海實驗動物科學【J】, 2001,21(3):169-170.

5) 周昆,屈彩芹. 動物實驗常用麻醉劑的比較和選擇. 實驗動物科學【J】, 2008,25(2):41-43.

6) Gernot M，Kaiser MD，Matthias M. General handling and anesthesia for experimental surgery in pigs【J】. Surgical Research，2006,130(1)：73-79.

7) 文小玲,張平,姜徳誦. 速眠新與戊巴比妥鈉在動物麻醉中的應(yīng)用比較. 南華大學學報醫(yī)學版【J】, 2004,32(1):131-132.

(收稿日期　20××-××-××)

作者簡介：周立才(1984-)男，北京市平谷區(qū)醫(yī)院醫(yī)師，碩士研究生，主要從事動物麻醉的研究。